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 Tecniche di trasformazione genetica delle piante superiori
 Piastra con calli in crescita
Conoscenza di base
L'uso di particolari classi di enzimi (endonucleasi, ligasi, polimerasi, invertasi, ecc...), ha permesso la creazione e clonazione del DNA ricombinante con operazioni del tipo "taglia e cuci". Dopo aver trasformato geneticamente i primi microoganismi, lo sviluppo delle tecniche di coltivazione in vitro e quelle di trasferimento del DNA ha consentito anche la realizzazione di organismi superiori geneticamente modificati.
Metodi di trasformazione
Negli ultimi dieci anni, oltre un centinaio di specie vegetali di interesse agrario sono state modificate geneticamente. Nella maggior parte dei casi si è trattato dell?introduzione di opportuni costrutti, costituiti principalmente da sequenze regolatrici e geni derivanti da batteri e virus (Transgeni), nel genoma delle piante superiori.
I metodi utilizzati allo scopo sono diversi di seguito ne ricordiamo alcuni: metodo dell?Agrobacterium tumefaciens, Tecnica Biolistica, Elettroporazione, Microiniezione, Fusione di liposomi, Vettori virali.
Tecniche più usate
Attualmente il metodo dell?Agrobacterium tumefaciens O> e la tecnica biolistica O> sono i metodi maggiormente usati per introdurre particolari sequenze di DNA nel genoma delle cellule vegetali.
Considerazioni
In generale, le tecniche di trasformazione genetica non sono precise (non si può prevedere il sito di inserzione, il numero di copie del gene inserito, i livelli di espressione del gene) né ?pulite? producono una serie di anomalie non prevedibili (inserzione di frammenti di DNA extra, riarrangiamenti e delezioni) soprattutto a livello del sito di inserzione del costrutto nel genoma delle cellule modificate.
Inoltre, durante la fase di coltura in vitro, nelle cellule del callo si verificano diverse mutazioni spontanee meglio note come ?mutazioni somatiche?.
Per saperne di più
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Bibliografia:
The Mutational Consequences of Plant Transformation di Jonathan R. Latham, Allison K. Wilson, and Ricarda A. Steinbrecher
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Links:
Università della California
Animazioni varie di Biologia Molecolare
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Cdg
